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上海晶抗生物牛白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Sandwich ELISA），用于定量檢測牛血清、血漿等生物樣本中的IL12B（又稱 IL-12 p40 亞基）含量。

一、核心原理

利用抗原 - 抗體特異性結(jié)合與酶促顯色反應(yīng)，通過“夾心"結(jié)構(gòu)捕獲目標(biāo)物，并將其濃度轉(zhuǎn)化為可測量的光信號。

固相捕獲：酶標(biāo)板微孔內(nèi)預(yù)包被高特異性的抗牛 IL12B 捕獲抗體。

樣本結(jié)合：加入待測樣本（或標(biāo)準(zhǔn)品），其中的牛IL12B抗原與捕獲抗體特異性結(jié)合。

檢測抗體結(jié)合：加入標(biāo)記的檢測抗體，識別并結(jié)合已捕獲的IL12B抗原，形成“捕獲抗體-IL12B-檢測抗體"的夾心復(fù)合物。

酶聯(lián)放大：加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的親和素，親和素與高親和力結(jié)合，將酶連接到復(fù)合物上。

顯色定量：加入TMB 底物，HRP 催化底物顯藍(lán)色；加終止液（硫酸）后變黃。

信號讀取：酶標(biāo)儀測450nm吸光度（OD 值），OD值與IL12B濃度正相關(guān)。

二、完整實(shí)驗(yàn)流程

加樣：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→溫育（抗原-捕獲抗體結(jié)合）→ 洗滌去未結(jié)合物。

加檢測抗體：加入標(biāo)記檢測抗體→溫育（形成夾心）→ 洗滌。

加酶結(jié)合物：加入HRP-親和素→溫育→洗滌。

顯色：加TMB底物→避光溫育顯色。

終止與讀數(shù)：加終止液→測OD450值。

計算：標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合→計算樣本IL12B濃度。

三、關(guān)鍵特點(diǎn)

特異性：雙抗體精準(zhǔn)識別牛IL12B，交叉反應(yīng)低。

靈敏度：檢測限通常 <10pg/mL。

定量：OD值與濃度線性相關(guān)，結(jié)果精準(zhǔn)。

通用：適用于血清、血漿、細(xì)胞上清等。

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